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          [發明專利]釀酒酵母工程菌、構建方法及其應用在審

          專利信息
          申請號: 202210419586.X 申請日: 2022-04-21
          公開(公告)號: CN114672426A 公開(公告)日: 2022-06-28
          發明(設計)人: 杜婕;李志剛;顏子豪;王煜軒;徐可馨;沈曉露;劉云 申請(專利權)人: 江蘇農林職業技術學院
          主分類號: C12N1/19 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12N15/90;C12N15/12;C12P21/02;C07K14/435;A23K10/18;A23K50/80;C12R1/865
          代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204 代理人: 柏尚春
          地址: 212400 江*** 國省代碼: 江蘇;32
          權利要求書: 暫無信息 說明書: 暫無信息
          摘要: 發明公開了釀酒酵母工程菌、構建方法及其應用。本發明所述的釀酒酵母工程菌具體為將如SEQ ID NO.1所示的基因片段MrLectin克隆到表達載體中,獲得重組表達載體,將重組表達載體與釀酒酵母菌株整合,獲得釀酒酵母工程菌。本發明采用釀酒酵母進行目的蛋白的真核表達,大大減少了包涵體的產生,實現了蛋白的活性表達,同時,本身作為水產養殖常用益生菌的釀酒酵母,活性蛋白表達菌株更易應用于水產養殖領域,對于提高蝦蟹動物的機體免疫力,從而促進水產養殖綠色健康穩定發展具有重要意義。
          搜索關鍵詞: 釀酒 酵母 工程 構建 方法 及其 應用
          【主權項】:
          暫無信息
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          • 本發明公開了一株產α?古巴烯的重組釀酒酵母及其應用,屬于代謝工程和生物工程領域。本發明產α?古巴烯的重組釀酒酵母菌株,其以釀酒酵母為宿主,異源表達了α?古巴烯合酶,過表達了法尼基焦磷酸合成酶和異戊烯焦磷酸異構酶。通過將能夠表達α?古巴烯合酶基因、法尼基焦磷酸合成酶基因和異戊烯焦磷酸異構酶基因的重組質粒轉入到釀酒酵母中得到產α?古巴烯的重組釀酒酵母菌株。本發明在釀酒酵母中引入外源基因來生產α?古巴烯,不需要利用石油資源來進行化學合成,減少了對石油資源的消耗和對環境的污染,實現了可持續發展。本發明可高效生產α?古巴烯,促進了α?古巴烯在食品、醫藥、農業、煙草等領域中的應用。
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          • 杜婕;李志剛;顏子豪;王煜軒;徐可馨;沈曉露;劉云 - 江蘇農林職業技術學院
          • 2022-04-21 - 2022-06-28 - C12N1/19
          • 本發明公開了釀酒酵母工程菌、構建方法及其應用。本發明所述的釀酒酵母工程菌具體為將如SEQ ID NO.1所示的基因片段MrLectin克隆到表達載體中,獲得重組表達載體,將重組表達載體與釀酒酵母菌株整合,獲得釀酒酵母工程菌。本發明采用釀酒酵母進行目的蛋白的真核表達,大大減少了包涵體的產生,實現了蛋白的活性表達,同時,本身作為水產養殖常用益生菌的釀酒酵母,活性蛋白表達菌株更易應用于水產養殖領域,對于提高蝦蟹動物的機體免疫力,從而促進水產養殖綠色健康穩定發展具有重要意義。
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          • 本發明涉及生物技術領域,具體涉及一種失活泛素連接酶提高酵母蝦青素產量的方法及重組菌株。該重組菌株由出發菌株紅發夫酵母經遺傳改造,敲除其中至少一個E3泛素連接酶獲得,所得重組菌株提高紅發夫酵母蝦青素的產量。本發明通過敲除紅發夫酵母E3泛素連接酶編碼基因,消除E3泛素連接酶對蝦青素合成的負調控作用,以提高蝦青素產量。與對照菌株相比,E3泛素連接酶基因敲除菌株的蝦青素細胞含量可以顯著提高8.3倍。該方法可應用于構建蝦青素高產菌株和提高蝦青素產量。
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          • 張洪波;從劍杭;黃燕;陳敏芳;何汶霞;李燕婷;何欣煜;陸佳燕 - 紹興文理學院
          • 2021-03-02 - 2022-06-21 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種高有機酸耐受性能的工業生產用釀酒酵母菌株及其構建方法,所述構建方法包括敲除一個蛋白酶A(PrA)編碼等位基因,并對第二個PrA編碼等位基因進行序列重組改造;本發明構建的重組菌株顯著提高了對有機酸的耐受性能,與原始菌株相比,在pH3.0的YPD培養條件下,檸檬酸對重組菌株生長抑制率降低了33.0%、酒石酸對重組菌株生長抑制率降低了26.0%、蘋果酸對重組菌株生長抑制率降低了77.1%;同時,本發明構建的重組菌株在進行厭氧發酵實驗中表現出高于原始菌株的乙醇發酵生成能力;本發明為不外加降酸劑和不改變生產工藝的前提下,解決有機酸對發酵的抑制提供了新的思路和方法,對穩定工業生產、降低生產成本和環境保護都具有實際價值和指導意義。
          • 一種高產紅沒藥烯的釀酒酵母工程菌及應用-202110088156.X
          • 孫杰;杭嘉煒;魏春;袁圍;汪釗 - 浙江工業大學
          • 2021-01-22 - 2022-06-21 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種高產紅沒藥烯的釀酒酵母工程菌及應用,所述釀酒酵母工程菌按如下方法構建:在增強甘油代謝途徑的釀酒酵母菌中,轉入紅沒藥烯合成酶基因Agbis,同時敲除葡萄糖阻遏轉錄因子MIG1,構建得到高產紅沒藥烯的酵母工程菌。本發明在酵母工程菌中采用增強甘油利用途徑和敲除葡萄糖阻遏轉錄因子MIG1的組合策略,使得紅沒藥烯搖瓶產量最終提高了91.1%,達到868.6mg/L,為目前報道的甘油蔗糖合成最小培養基搖瓶發酵最高產量。
          • 產2′-巖藻糖基乳糖的重組工程菌及其構建方法與應用-202210531706.5
          • 毛相朝;姜宏;周文婷;全永奕 - 中國海洋大學
          • 2022-05-17 - 2022-06-17 - C12N1/19
          • 本發明公開了產2′?巖藻糖基乳糖的重組工程菌及其構建方法與應用,屬于基因工程技術領域。本發明公開了一種產2′?巖藻糖基乳糖的重組工程菌,菌株名為KMdeLac24?FL15,已于2022年3月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心,保藏編號為CGMCCNO.24549,分類命名為馬克斯克魯維酵母(Kluyveromyces marxianus)。該菌株能高效率地表達2′?巖藻糖基乳糖,在制備2′?巖藻糖基乳糖中的應用。本發明還公開了產2′?巖藻糖基乳糖的重組工程菌及其構建方法,還公開了該重組工程菌在制備2′?巖藻糖基乳糖中的應用。
          • 一種具有高同源重組效率的畢赤酵母菌株及其應用-202011458293.X
          • 周雍進;段興鵬 - 中國科學院大連化學物理研究所
          • 2020-12-10 - 2022-06-14 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種用于畢赤酵母同源重組的菌株及其應用,菌株包括畢赤酵母基因和過表達PpRAD52基因。本發明通過在現有畢赤酵母基因與過表達PpRAD52基因的整合、敲除KU70/KU80基因或抑制KU70/KU80基因表達強度,提高了畢赤酵母的同源重組效率。本發明用于畢赤酵母同源重組的菌株具有高同源整合能力,并且證實了通過表達同源重組相關蛋白以及下調非同源末端連接強度均可以改善畢赤酵母同源重組活力。
          • 一種具有強化防曬效果的釀酒酵母及其應用-202210118631.8
          • 伍小藝;王金晶;余施雨;易崇華;周庭安;李崎;鈕成拓;鄭飛云;劉春鳳;許鑫 - 江南大學
          • 2022-02-08 - 2022-06-14 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種具有強化防曬效果的釀酒酵母及其應用,屬于生物工程領域。本發明提供了一種重組釀酒酵母,所述重組釀酒酵母同時表達了合成gadusol的EEVS、MT?Ox及木糖還原酶XR、木糖醇脫氫酶XDH、木酮糖激酶XK,實現了高效合成gadusol。采用本發明的重組釀酒酵母JN?BYXXXEMO制備得到的gadusol含量可高達40.5mg/L。本發明發現在BY4743中導入gadusol生產途徑(EEVS、MT?Ox),能夠大幅度提高酵母生物量,同時,木糖代謝途徑的導入能夠大幅提高酵母gadusol產量,能夠顯著降低生產成本。
          • 一種生產α-蛇麻烯的重組解脂耶氏酵母菌及其構建方法和應用-202011574323.3
          • 黃和;郭琪;施天穹;孫小曼;彭倩倩 - 南京師范大學
          • 2020-12-25 - 2022-06-14 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種生產α?蛇麻烯的重組解脂耶氏酵母菌及其構建方法和應用,所述重組解脂耶氏酵母菌是在解脂耶氏酵母基因組中插入優化的α?蛇麻烯合酶編碼基因ACHS2和tHMGR編碼基因后得到。本發明重組解脂耶氏酵母菌能夠高效合成α?蛇麻烯,構建方法高效,操作簡單,此外本發明提供的收集產物的方法采用邊發酵邊萃取的方法,及時的將生產的α?蛇麻烯萃取至有機相中,緩解了胞內溶解α?蛇麻烯的壓力,有效提高α?蛇麻烯的產量,為人工細胞合成α?蛇麻烯奠定了基礎。
          • 一種非特異性過氧合酶的重組菌株及其構建方法和應用-202110205876.X
          • 藍東明;乜曉爽;王永華;馬云建;王方華;楊博 - 華南理工大學
          • 2021-02-24 - 2022-06-14 - C12N1/19
          • 本發明公開一種非特異性過氧合酶的重組菌株及其構建方法和應用,屬于酶工程應用領域。所述重組菌株以pPICZαA質粒為出發載體,以畢赤酵母作為宿主菌,表達非特異性過氧合酶GmaUPO;所述非特異性過氧合酶GmaUPO的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本發明通過基因工程技術,成功在畢赤酵母中異源表達了GmaUPO,并優化了發酵條件,進行了重組酶的催化應用的初步研究,旨在擴大UPO生物酶的資源庫,以替代現有的化學法進行芳香烴的高效清潔生產,同時為其催化應用提供一定的研究基礎。
          • 基于液滴微流控芯片的畢赤酵母高通量篩選方法-201910212336.7
          • 涂然;王欽宏;呂彤 - 中國科學院天津工業生物技術研究所
          • 2019-03-20 - 2022-06-14 - C12N1/19
          • 本發明屬于微生物生物技術領域,涉及一種基于液滴微流控芯片的畢赤酵母高通量篩選方法,所述篩選方法包括如下步驟,步驟1、構建畢赤酵母菌株;步驟2,畢赤酵母菌株突變體庫;步驟3,對畢赤酵母菌株突變體庫種的菌株進行單液滴包埋和液滴培養,得到含有畢赤酵母菌株突變體的液滴,步驟4,根據液滴內熒光的強度進行液滴微流控分選,篩選出液滴;步驟5、對液滴分別進行搖瓶發酵及復篩,得到分泌木聚糖酶能力提高的畢赤酵母菌株。本發明采用液滴微流控技術對木聚糖酶融合熒光蛋白的畢赤酵母菌株進行篩選,其篩選通量可以達到每小時10萬菌株,篩選百萬級別的菌株庫僅需要10h,消耗熒光試劑總體積100μL。
          • 一種生產D-檸檬烯的酵母及其應用-202210243089.9
          • 劉龍;陳堅;呂雪芹;堵國成;李江華;劉延峰;孔曉 - 江南大學
          • 2022-03-11 - 2022-06-10 - C12N1/19
          • 本發明屬于代謝工程領域,具體涉及一種生產D?檸檬烯的釀酒酵母及其應用。本發明以釀酒酵母為出發菌株,將自然界中不存在于同一生物體的檸檬烯合成酶基因有機整合到釀酒酵母中,優化外源基因的表達,過表達MVA途徑基因關鍵基因、增加乙酰輔酶A和NADPH前體供應等方面,實現檸檬烯在釀酒酵母中的高效合成,最終得到的菌株相對于原菌株具有較好的生長速率。搖瓶發酵最終實現檸檬烯產量達657mg/L,比原產量提高2.021倍,實現檸檬烯在釀酒酵母中的高效合成,具有較大的應用推廣價值。
          • 一種生產麥角甾醇的釀酒酵母工程菌株及其應用-202210347682.8
          • 周景文;曾偉主;魏文倩;余世琴;徐沙 - 江南大學
          • 2022-04-01 - 2022-06-10 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種生產麥角甾醇的釀酒酵母工程菌株及其應用,屬于基因工程和生物工程技術領域。本發明通過敲除釀酒酵母基因組中的非路徑基因ROX1、DOS2、YJL064W、YPL062W和NEM1,使麥角甾醇積累量大幅度提升,并在此基礎上對基因ERG1、ERG2、ERG3、ERG4、ERG11、CTT1加強表達,進一步提高胞內麥角甾醇的積累量,并將基因tHMG1、IDI多拷貝整合,加強前體乙酰CoA的向下轉化以加強前體角鯊烯的供應,并且將POS5、ERG4、ERG2、ERG3多拷貝整合,使構建的釀酒酵母發酵72h的麥角甾醇產量可達292.60mg/L,為甾體類化合物的生物合成奠定了基礎。
          • 一種產γ-亞麻酸的基因工程菌株、其構建方法及其應用-202210402994.4
          • 汪慶卓;劉云起;杜菲 - 南京師范大學
          • 2022-04-18 - 2022-06-10 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種產γ?亞麻酸的基因工程菌株、其構建方法及其應用,屬于生物工程技術領域。本發明以解脂耶氏酵母Yarrowia lipolytica為出發菌株,表達Δ6去飽和酶基因同時過表達β?氧化途徑的PEX4基因和PEX5基因;本發明構建的工程菌株可在以廢棄食用油為唯一碳源的培養基上合成γ?亞麻酸。本發明的工程菌穩定性好、胞內油脂γ?亞麻酸含量高,合成途徑不受季節限制、產量穩定、發酵底物成本低廉,并且可資源化利用廢棄食用油。本發明適用于構建產γ?亞麻酸的基因工程菌株,構建的工程菌株進一步應用于生產γ?亞麻酸。
          • 一株表達骨橋蛋白的畢赤酵母菌株-202210322609.5
          • 劉龍;陳堅;呂雪芹;堵國成;李江華;劉延峰;張智航;陶孟瑞;孫丹 - 江南大學
          • 2022-03-29 - 2022-06-10 - C12N1/19
          • 本發明公開了一株表達骨橋蛋白的畢赤酵母菌株,屬于基因工程領域。本發明在畢赤酵母基因組上AOX1位點成功整合包含PAOX1啟動子、α信號肽和氨基酸序列如SEQ ID NO.1的骨橋蛋白的骨橋蛋白表達框。通過發酵實驗發現,本發明提供的畢赤酵母基因工程菌株能夠成功表達骨橋蛋白并部分分泌至胞外,但發酵后期蛋白分泌遲滯,大部分蛋白進入液泡。通過Western Blot驗證和ELISA定量測定,確定本發明實現了骨橋蛋白的成功表達,且骨橋蛋白的表達量達到32.2mg/L。
          • 生產多胺綴合物的酵母-202080075687.9
          • 秦久福;J·尼爾森 - 克里希有限公司
          • 2020-10-27 - 2022-06-07 - C12N1/19
          • 本發明涉及在能夠生產至少一種多胺的酵母細胞中的多胺綴合物的生產。該酵母細胞還包含多胺:谷胱甘肽連接酶編碼基因和至少一種多胺合酶編碼基因,但是缺少多胺氧化酶編碼基因或包含擾亂的多胺氧化酶編碼基因。該酵母細胞能夠生產各種多胺?谷胱甘肽綴合物。
          • 生產多胺類似物的酵母-202080075684.5
          • 秦久福;J·尼爾森 - 克里希有限公司
          • 2020-10-27 - 2022-06-03 - C12N1/19
          • 本發明涉及在能夠生產至少一種多胺的酵母細胞中的多胺類似物的生產。該酵母細胞還包含4?香豆酸:CoA連接酶編碼基因、至少一種多胺N??;D移酶基因和至少一種多胺合酶編碼基因,但是缺少多胺氧化酶編碼基因或包含擾亂的多胺氧化酶編碼基因。該酵母細胞能夠生產單取代和/或多取代N??;喟?。
          • 一種高效生產視黃酸的基因工程菌及其構建方法和應用-202210372894.1
          • 葉麗丹;于洪巍;胡瓊越 - 浙江大學
          • 2022-04-11 - 2022-06-03 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種高效生產視黃酸的基因工程菌及其構建方法和應用,屬于基因工程領域。本發明以產視黃醛的酵母工程菌株為出發菌,利用基因整合技術或者導入重組表達質粒的方式,使得來源于釀酒酵母的醛脫氫酶編碼基因在工程菌株內成功表達,參與到視黃酸的合成,實現以安全、高效的酵母為細胞工廠高效率地生產視黃酸。進一步通過增加拷貝數,并敲除甲羥戊酸途徑轉錄抑制因子編碼基因提高視黃酸的產量。利用本發明構建的工程菌株在搖瓶單相和兩相發酵培養后合成視黃酸的產量,優于現有技術報道,具有良好的應用前景。本發明還提供了一種實現視黃酸胞外分泌的方法,在發酵過程中添加十二烷或橄欖油,使得合成的視黃酸分泌到胞外。
          • 一種工程菌株及其構建方法和應用-201911285329.6
          • 趙宗保;呂力婷;焦翔;張素芳 - 中國科學院大連化學物理研究所
          • 2019-12-13 - 2022-06-03 - C12N1/19
          • 本申請公開了一種工程菌株,所述工程菌株為LDP1基因和CALs基因功能滅活的工程菌株ΔCALsΔLDP1。本申請提供了一種通過脂滴蛋白基因的敲除實現對脂滴大小調控的方法。本申請通過基因工程,實現調控脂滴大小并弱化油脂合成代謝途徑,為天然產油酵母菌株工程改造,使代謝流更多地流向其他代謝途徑,為萜類化合物的合成奠定了基礎,將有力促進今后圓紅冬孢酵母或其他產油酵母萜類化合物合成的代謝工程研究。
          • 高產松柏醇的釀酒酵母工程菌及其構建和應用-202010062695.1
          • 訾佳辰;楊加增 - 暨南大學
          • 2020-01-20 - 2022-06-03 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種高產松柏醇的釀酒酵母工程菌及其構建和應用。該工程菌以釀酒酵母為出發菌株,過表達ZWF1、ARO4K229L、ARO7G229S、ARO8、TYR1、BDH1E221S/I222R/A223S、COMT1、4CL5、CAD、CCR、HpaB、TAL和PhaC基因;其中:ARO4K229L為ARO4的第229位的賴氨酸突變為亮氨酸;ARO7G229S為ARO7的第229位的甘氨酸突變為絲氨酸;BDH1E221S/I222R/A223S為BDH1的第221位的谷氨酸突變為絲氨酸,第222位的異亮氨酸突變為精氨酸,第223位的丙氨酸突變為絲氨酸。該酵母工程菌可以通過發酵獲得松柏醇。
          • 高產紫杉葉素的釀酒酵母工程菌及其構建和應用-202010062712.1
          • 訾佳辰;楊加增 - 暨南大學
          • 2020-01-20 - 2022-06-03 - C12N1/19
          • 本發明公開了一種高產紫杉葉素的釀酒酵母工程菌及其構建和應用。該工程菌以釀酒酵母為出發菌株,過表達ARO4K229L、ARO7G229S、ARO8、TYR1、BDH1E221S/I222R/A223S、4CL1、F3H、F3’H、CPR、CHI、TAL和CHS基因;其中,ARO4K229L為ARO4基因的第229位的賴氨酸突變為亮氨酸;ARO7G229S為ARO7基因的第229位的甘氨酸突變為絲氨酸;BDH1E221S/I222R/A223S為BDH1基因的第221位的谷氨酸突變為絲氨酸,第222位的異亮氨酸突變為精氨酸,第223位的丙氨酸突變為絲氨酸。該工程菌株可以經過發酵獲得紫杉葉素。
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