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          [發明專利]一種高產戊二胺的大腸桿菌工程菌與方法有效

          專利信息
          申請號: 201911230411.9 申請日: 2019-12-04
          公開(公告)號: CN111117940B 公開(公告)日: 2022-06-28
          發明(設計)人: 齊崴;尤生萍;張偉;芮金秋;呂佳佳;蘇榮欣 申請(專利權)人: 天津大學
          主分類號: C12N1/21 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12P13/00;C12R1/19
          代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201 代理人: 曹玉平
          地址: 300350 天津市津南區海*** 國省代碼: 天津;12
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          摘要: 發明涉及一種高產戊二胺的大腸桿菌工程菌與方法,該工程菌是保藏編號為CGMCC NO.17454的大腸桿菌;該方法為:(1)構建外源表達L?賴氨酸脫羧酶的大腸桿菌工程菌TJU?cadA?1,L?賴氨酸脫羧酶的酶活是空載菌株的100倍左右;(2)將富含L?賴氨酸脫羧酶全細胞透性處理,透性細胞的L?賴氨酸脫羧酶的酶活是全細胞的3~4.5倍;(3)利用透性細胞催化L?賴氨酸鹽酸鹽生產戊二胺,戊二胺產率在90%~100%,濃度可達220g/L以上。本發明利用L?賴氨酸鹽酸鹽高效生產戊二胺,與現有工藝相比,無需諸如昂貴的IPTG誘導劑,傳質效率高,產率高,生產成本低,更具經濟可行性和實用性。
          搜索關鍵詞: 一種 高產 戊二胺 大腸桿菌 工程 方法
          【主權項】:
          暫無信息
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          • 本發明公開了利用溫敏型啟動子高效表達乳鐵蛋白的菌株及其構建方法與應用,本發明通過融合PCR的方式構建啟動子Ppr和乳鐵蛋白的表達框,并利用P43啟動子控制阻遏蛋白CI857的表達。進一步優化Ppr啟動子上CI857結合位點的序列的間隔長度,通過發酵實驗發現,不同長度的間隔序列導致不同的轉錄水平。其中三個結合位點之間的間隔序列分別為10bp時,與初始啟動子相比,乳鐵蛋白的轉錄水平提高了將近5倍,通過western blot發現乳鐵蛋白的表達量增加了約3.2倍,達到了80mg/L。本發明能夠有效的提高乳鐵蛋白的表達量,并避免額外誘導劑的添加。
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          • 2021-06-30 - 2022-06-28 - C12N1/21
          • 本方案提供一種高效表達MccJ25的工程菌株,以解決現有技術中Microcin J25的表達量低的問題。通過下述方法構建而成:分別對mcjABCD進行基因操作,成為一個方向,而且在大腸桿菌中共用一個啟動子T7,克隆在載體pBR322,實現了在大腸桿菌的高效表達,表達量為2.4g/L。本方案構建了新的表達載體,分別構建大腸桿菌表達載體和植物乳桿菌表達載體,對MccJ25進行高效表達,同時采用定向進化技術,對MccJ25基因簇進行分子進化,實現了MccJ25的高效表達。在大腸桿菌進行胞外表達和植物乳桿菌進行胞內表達,表達量分別達到為4.1g/L和2.3g/L,達到產業化的水平,為下一步生物獸藥和飼料添加劑的應用奠定了基礎。
          • 一種高產5-氨基乙酰丙酸的重組大腸桿菌菌株及其應用-202210288690.X
          • 王春平;楊夢杰 - 北京道合成企業管理有限公司
          • 2022-03-23 - 2022-06-28 - C12N1/21
          • 本發明公開了一種用于生產5?氨基乙酰丙酸(5?ALA)的重組大腸桿菌菌株;本發明還公開了一條高效合成5?氨基乙酰丙酸的途徑:強化大腸桿菌自身的5?氨基乙酰丙酸合成酶(HemL和HemA),菌株初步具有合成5?氨基乙酰丙酸的能力;強化5?氨基乙酰丙酸外排蛋白eamA基因的表達,提高菌株的5?氨基乙酰丙酸外排能力;引入外源5?氨基乙酰丙酸合成酶hemA基因,增強菌株的5?氨基乙酰丙酸合成能力;改造葡萄糖利用途徑的galR、glk、ppc基因,提高葡萄糖的利用效率;敲除代謝旁路的基因(hemF、poxB和aceB)。本發明構建的重組大腸桿菌菌株具有高效利用葡萄糖和甘氨酸合成5?氨基乙酰丙酸的能力,使其具有工業生產5?氨基乙酰丙酸的用途。
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          • 張娟;馮志彬 - 魯東大學
          • 2019-06-03 - 2022-06-28 - C12N1/21
          • 本發明公開了一種β?丙氨酸生產菌及其制備方法和用途,所述β?丙氨酸生產菌(Escherichia coli),保藏編號為CGMCC NO:17830。本發明所構建的β?丙氨酸生產菌在發酵過程中不需要添加天冬氨酸,就能夠實現發酵過程中發酵液中β?丙氨酸的有效積累,提高了β?丙氨酸的產量及糖轉化率,β?丙氨酸的產量高達50g/L,糖酸轉化率達40%,具有大規模生產的應用潛力。
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          • 徐振上;劉新利;王婷 - 齊魯工業大學
          • 2020-04-07 - 2022-06-28 - C12N1/21
          • 本發明公開了一種食品級嗜熱鏈球菌表達載體的構建方法,所述食品級嗜熱鏈球菌表達系統包含食品級宿主嗜熱鏈球菌CH3080、食品級表達載體pST4040;所述食品級宿主嗜熱鏈球菌CH3080是采用同源重組技術敲除嗜熱鏈球菌基因組上的β?半乳糖苷酶N端第7個至第36個氨基酸編碼基因而獲得,喪失利用乳糖的能力;食品級表達載體pST4040包含來自于嗜熱鏈球菌的β?半乳糖苷酶N端第1個至第53個氨基酸編碼基因作為互補篩選標記;所述表達系統為食品級表達系統,其DNA元件來自于公認安全的微生物,不含抗生素抗性篩選標記,可以直接應用于食品醫藥等行業中。
          • 一種高產戊二胺的大腸桿菌工程菌與方法-201911230411.9
          • 齊崴;尤生萍;張偉;芮金秋;呂佳佳;蘇榮欣 - 天津大學
          • 2019-12-04 - 2022-06-28 - C12N1/21
          • 本發明涉及一種高產戊二胺的大腸桿菌工程菌與方法,該工程菌是保藏編號為CGMCC NO.17454的大腸桿菌;該方法為:(1)構建外源表達L?賴氨酸脫羧酶的大腸桿菌工程菌TJU?cadA?1,L?賴氨酸脫羧酶的酶活是空載菌株的100倍左右;(2)將富含L?賴氨酸脫羧酶全細胞透性處理,透性細胞的L?賴氨酸脫羧酶的酶活是全細胞的3~4.5倍;(3)利用透性細胞催化L?賴氨酸鹽酸鹽生產戊二胺,戊二胺產率在90%~100%,濃度可達220g/L以上。本發明利用L?賴氨酸鹽酸鹽高效生產戊二胺,與現有工藝相比,無需諸如昂貴的IPTG誘導劑,傳質效率高,產率高,生產成本低,更具經濟可行性和實用性。
          • 阻斷甘油-葡萄糖代謝途徑的Diolis梭菌堿基編輯突變株-201910872091.0
          • 金明杰;李昂;聞志強 - 南京理工大學
          • 2019-09-16 - 2022-06-28 - C12N1/21
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          • 2018-06-28 - 2022-06-28 - C12N1/21
          • 本發明公開了一種生產黃嘌呤的重組菌及其構建方法和應用,屬于基因工程技術領域。該重組菌是以大腸桿菌為出發菌株,分別敲除大腸桿菌基因組上的轉錄阻遏蛋白基因purR、磷酸葡萄糖異構酶基因pgi、磷酸葡萄糖酸脫水酶基因edd、腺苷酸琥珀酸合成酶基因purA和GMP合成酶基因guaA,過表達D128A突變的PRPP合成酶基因prs和K326Q、P410W雙突變的PRPP轉酰胺酶purF。同時,本發明還提供了該重組菌的制備方法及利用該重組菌的生產黃嘌呤的方法。本發明首次實現了重組菌中黃嘌呤的高效生物合成。該重組菌適用于發酵生產黃嘌呤。
          • 一種合成次黃嘌呤的重組菌及其構建方法與應用-201810687117.X
          • 趙廣;劉敏;咸漠;高文杰 - 中國科學院青島生物能源與過程研究所
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          • 本發明公開了一種合成次黃嘌呤的重組菌及其構建方法與應用,屬于基因工程技術領域。該重組菌是以大腸桿菌為出發菌株,分別敲除大腸桿菌基因組上的轉錄阻遏蛋白基因purR、磷酸葡萄糖酸脫水酶基因edd、腺苷酸琥珀酸合成酶基因purA和次黃苷酸脫氫酶基因guaB,并且過表達D128A突變的PRPP合成酶基因prs和K326Q、P410W雙突變的PRPP轉酰胺酶基因purF。同時,本發明還提供了該重組菌的制備方法及利用該重組菌的生產次黃嘌呤的方法。本發明首次實現了工程大腸桿菌中次黃嘌呤的高效生物合成。該重組菌適用于發酵生產次黃嘌呤。
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          • 徐振上;王婷;梁琰 - 齊魯工業大學
          • 2020-03-27 - 2022-06-24 - C12N1/21
          • 本發明公開了一種食品級嗜熱鏈球菌表達系統及其在酸奶制備中的應用。所述食品級嗜熱鏈球菌表達系統包含食品級宿主嗜熱鏈球菌CH3070、食品級表達載體pST5240;所述食品級宿主嗜熱鏈球菌CH3070是采用同源重組技術敲除嗜熱鏈球菌JIM8232基因組上的乳糖轉運酶STlacS基因而獲得,喪失利用乳糖的能力;食品級表達載體pST5240包含來自于植物乳桿菌的乳糖轉運酶LPlacS基因作為篩選標記,能賦予菌株代謝半乳糖的能力和更高的生物量;所述表達系統在異源蛋白表達中應用,表達效果顯著;所述表達系統不含抗生素抗性篩選標記,為食品級表達系統,可以直接應用于酸奶發酵中。
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